布拉德福蛋白質定量法

布拉德福蛋白質定量法（Bradford protein assay），亦稱作「考馬斯亮藍法」、「考馬斯藍染色法」（coomassie blue staining），為一種利用光譜學技術分析溶液中蛋白質濃度的技術。本定量法會受待測胺基酸序列影響，此方法為Marion M. Bradford醫生所開發。

原理

左：布拉德福溶液
右：布拉德福溶液+溶菌酶。

布拉德福蛋白質定量法為一種利用比色法測定蛋白質濃度的化驗法。考馬斯亮藍G-250在酸性環境下，會從紅色型態轉為藍色型態，並與蛋白質緊密結合。在形成這個複合物的過程中會經歷兩種反應：紅色態的考馬斯亮藍會先將其自由電子丟給蛋白質的可電離區，造成蛋白質構型改變，並暴露其疏水性區段。於是蛋白質的三級結構會以凡得瓦力與染劑結合。此外，染劑中的負電區會與蛋白質中的正電區相互結合，與蛋白質結合的考馬斯亮藍會因此穩定其藍色構型，造成溶液顏色改變，此時即可利用光譜儀來測量此變化。

與蛋白結合之後的染料，在一段時間（2 分鐘到 1 小時）之內，其吸收光譜圖在 595 nm 處有一個最大吸收峰。 染料在與蛋白結合前，以陽離子形態存在，顯紅色或者綠色；與蛋白結合之後，染料分子的陰離子形態被穩定，顯藍色。染料的吸收光譜在 595 nm 處的吸收峰的增加，正比於結合了蛋白質的染料分子數目，故也正比於樣品中蛋白質的數目（濃度）。

布拉德福蛋白質定量法與其它測量蛋白的方法不同，不容易受到蛋白質中其它化學成分的影響。

缺點

此蛋白質分析法會受幾種洗滌劑和中性鹽的干擾，如SDS，Triton。 結果也取決於所分析蛋白質中氨基酸的種類。

實驗方法

實驗器材

• 0.15 M 氯化鈉
• 微量吸管

實驗步驟（標準分析，濃度：200-1500 µg/mL）

1. 準備一純蛋白質（通常以牛血清蛋白）溶於0.15 M 氯化鈉溶液中，稀釋濃度為250、500、750和1500 µg/mL。並同時以同濃度稀釋待測蛋白質。
2. 在每個試管加入 100 µL 的稀釋蛋白質
3. 加入 5.0 mL 的考馬斯亮藍G-250到各試管並混合均勻。
4. 將光譜儀波長調整至 595 nm，並以無蛋白質的一管作為基準。
5. 5分鐘後測量各試管在 595 nm 下的吸光值
6. 畫出標準曲線，計算其吸光係數，並推估蛋白濃度

替代化驗法

其他替代蛋白質化驗法還有：

• 紫外－可見分光光度法
• 雙縮脲試劑
• Lowry protein assay
• BCA protein assay
• Amido black protein assay

參考文獻

• Zor, T.; Selinger, Z., Linearization of the Bradford protein assay increases its sensitivity: theoretical and experimental studies, Anal. Biochem., 1996, 236: 302–308, PMID 8660509, doi:10.1006/abio.1996.0171 
• Noble, J.E.; Bailey, M.J.A., Quantitation of Protein, Methods Enzymol., 2009, 463: 73–95, doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1 
• Albright, Brian, Mathematical Modeling with Excel: 60, 2009, ISBN 978-0763765668 
• Stephenson, Frank Harold, Calculations for molecular biology and biotechnology: a guide to mathematics in the laboratory: 252, 2003, ISBN 0126657513 
• Dennison, Clive, A guide to protein isolation, Focus on structural biology, 2003, 3: 39, ISBN 1402012241 
• Ibanez, Jorge G., Environmental chemistry: fundamentals: 60, 2007, ISBN 0387260617 

外部連結

• Bradford assay chemistry （頁面存檔備份，存於網際網路檔案館）
• Variable Pathlength Spectroscopy （頁面存檔備份，存於網際網路檔案館）
• OpenWetWare （頁面存檔備份，存於網際網路檔案館）