氧化酶試驗
生化與微生物檢測技術
氧化酶試驗（英語：Oxidase test）是一種用於確定生物體是否具有細胞色素c氧化酶的試驗。該試驗用於幫助區分奈瑟氏菌、莫拉氏菌、彎曲桿菌和巴斯德氏菌（氧化酶陽性）。 它還用於區分假單胞菌和相關物種。[1]
分類
菌株可以分為氧化酶陽性（OX+）或氧化酶陰性（OX-）。
OX+
OX+通常意味着細菌含有細胞色素c氧化酶（也稱為複合物IV），因此可以通過電子傳遞鏈將O2轉化為H2O2或H2O，從而利用氧氣產生能量。
許多革蘭氏陰性的螺旋彎曲桿菌也都是OX+，例如幽門螺桿菌、霍亂弧菌和空腸彎曲桿菌。
氧化酶可變性
OX−
OX−通常意味着細菌不含細胞色素c氧化酶，因此，要麼不能使用氧氣通過電子傳遞鏈產生能量，要麼使用不同的細胞色素將電子傳遞給氧氣。
機制
該測試使用浸有試劑的圓盤，例如N,N,N',N'-四甲基對苯二胺（TMPD）或N,N-二甲基對苯二胺（DMPD，也是一種氧化還原指示劑）。該試劑在氧化時呈深藍色至栗色，在還原時呈無色。氧化酶陽性細菌具有細胞色素氧化酶或靛酚氧化酶（一種含鐵的血紅蛋白）。[5]這兩者都能催化從供體化合物（NADH）到電子受體（通常是氧）的傳輸。試驗試劑TMPD充當氧化酶的人工電子供體。被氧化的試劑形成了有色化合物靛酚藍。細胞色素系統通常僅存[1]在於能夠使用氧氣作為末端電子受體的好氧生物中。這種新陳代謝的最終產物要麼是水，要麼是經過過氧化氫酶降解的過氧化氫。
流程
- 用大約四個去離子水接種環潤濕每個圓盤。
- 使用一個環將大量的純細菌無菌地轉移到圓盤中。
- 觀察圓盤上的接種區域，持續時間長達三分鐘。如果接種區域變成深藍色至栗色或幾乎黑色，則結果為陽性。如果三分鐘內沒有發生顏色變化，則結果為陰性。
在替代方式中，可以使用單線劃線接種的無菌技術製備在胰蛋白酶大豆瓊脂平板上培養的活細菌。接種後的平板在37°C下孵育24至48小時以建立菌落。應使用新鮮的細菌製劑。菌落在培養基上生長後，將2至3滴DMPD試劑添加到每個待測生物體的表面。
- 陽性測試將導致顏色在10至30秒內從紫色變為紫色。
- 陰性測試將導致淡粉色或無着色。
參考文獻
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