EcoRV（V是5的意思）是一种第二型限制内切酶，来自某些特定品系的大肠杆菌（Escherichia coli），此细菌的学名也是EcoRV前三个字母的由来。
EcoRV是分子生物学与生物技术上常使用的限制酶，可辨识出一段含有6个碱基的5'GAT|ATC-3'（|为切开的位置）DNA序列，以及互补的3'-CTA|TAG-5'，以产生平整末端的方式将此序列切开。
EcoRV所能辨识并切开的序列。
EcoRV与DNA形成的复合体。
